新葡萄8883官网AMG推出的乙型流感病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒是一款基于探针法荧光定量PCR原理研发的高效检测试剂盒,具备以下显著特点:
主要特点
1. **即开即用**:用户只需提供样品DNA模板,便可立即进行实验。
2. **高灵敏度**:经过优化的引物和其他组分确保试剂盒具备卓越的灵敏度。
3. **阳性对照**:本试剂盒提供可靠的阳性对照,有助于区分假阴性样品。
4. **高特异性**:引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域,确保不与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
5. **适用性广**:本试剂盒既可用于定性检测,也可进行定量检测,定量时的线性范围达到至少5个数量级。
6. **充足的反应次数**:可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. **科研专用**:本产品仅供科研目的使用。
使用方法
1. 样本准备
可根据选择的方法提取样品DNA,本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 稀释阳性对照
在独立区域进行样品稀释,以避免污染:
- 准备6个离心管,标记为7, 6, 5, 4, 3, 2。
- 向每个管中添加45μL DEPC-H2O。
- 在7号管中加入5μL阳性对照(1×10E8拷贝/μL),震荡1分钟以得到1×10E7拷贝/μL的标准样品,置冰待用。
- 依此类推,依次在6号、5号管中进行稀释,最终得到6个稀释标准样品。
3. 试剂配制
准备N+2个qPCR管,分别向每个PCR管中添加所需成分,详细配制步骤可咨询新葡萄8883官网AMG。
4. 添加模板
向qPCR管中加入2μL模板,按照阴性对照、待测样品模板和阳性对照的顺序加入,并进行离心。
5. 扩增反应
将PCR管放入PCR扩增仪器,按照规定的扩增程序进行反应,详细步骤可向新葡萄8883官网AMG索取。
6. 结果分析
如果制作了标准曲线,将阳性对照浓度的log值与Ct值绘制标准曲线,推算样品DNA浓度。若未制作标准曲线,按照以下标准判断结果:
- **阳性对照**:Ct值<30,出现明显指数增长和典型的S型曲线。
- **阴性对照**:Ct值38或无Ct值,无明显增长。
- **样本结果**:Ct值<35,结果为阳性;Ct值38或无Ct值,结果为阴性;若Ct值在35-38范围,需复检。
运输与保存
在低温条件下运输,存储温度为-20℃,保存期限为一年。阳性对照需单独存放,避免污染其他试剂。