新葡萄8883官网AMG推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有多项显著特点。

产品特点

1. 即开即用：用户仅需提供样品DNA模板即可。
2. 高灵敏度：经过优化的引物和组分，提升了测试的灵敏度。
3. 阳性对照：提供阳性对照，有助于识别假阴性样品。
4. 高特异性：引物基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区设计，能够有效避免与其他生物样本DNA的交叉反应。
5. 定性与定量检测：可用于定性和定量检测，定量时线性范围至少涵盖5个数量级。
6. 该产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品仅限科研使用。

使用方法

一、DNA提取

使用自选的方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

为避免污染样品或其他试剂，请在独立区域进行稀释操作。具体步骤如下：
1. 标记6个离心管为7、6、5、4、3和2。
2. 向每个管中添加45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，即得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放入冰箱待用。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，即得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，放冰箱待用。
5. 重复上述步骤，直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品。

三、试剂配制

若有N个待检样品，需准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照）。按照详细说明书的要求向各PCR管中添加相关成分，并转移至样本准备区。

四、添加模板

向qPCR管中添加2μl模板，按照顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管置于PCR扩增仪器的样品槽中，按照详细说明书进行扩增。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，则横轴为阳性对照浓度的log值，纵轴为Ct值，绘制标准曲线后以待测样品的Ct值推算出样品DNA浓度。
2. 若未制作标准曲线，依据以下标准判定结果：
- 阳性对照：Ct值<30，存在明显的指数增长，形成典型的S型曲线。
- 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长。
- 样本检测：Ct值<35，表明样本中检测出婴儿利什曼虫，为阳性；Ct值38或无Ct值，为阴性；Ct值在35-38范围内需重复实验。

运输及保存

本产品应低温运输，储存于-20℃环境下，保存期限为一年。阳性对照须单独放置，避免污染其他试剂。
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