本产品是基于探针法荧光定量PCR原理研发而成的检测试剂盒，具有以下特点：

产品特点

1. 新葡萄8883官网AMG的检测试剂盒即开即用，用户只需提供样品DNA模板，即可快速开始实验。

2. 所有的引物及组分经过精心优化，确保高灵敏度的检测结果。

3. 提供阳性对照，便于有效区分假阴性样品，提升检测的可靠性。

4. 引物设计具备高特异性，根据中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区进行设计，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. 本试剂盒既可用于定性检测，又可进行定量检测，其中定量检测的线性范围至少为五个数量级。

6. 新葡萄8883官网AMG的产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应，满足多次实验需求。

7. 本产品仅限于科研用途，适合在实验室环境下使用。

使用方法

一、DNA提取 (样本制备区)

使用用户自选的方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上的大多数核酸提取试剂盒兼容，可以灵活选择合适的提取方案。

二、稀释标准曲线样品 (样本制备区)

由于阳性对照浓度较高，因此请在独立的区域内进行稀释操作，以避免污染样品或其他试剂组分。

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

2. 将45μL DEPC-H2O加入每个管内（使用带芯枪头效果更佳）。

3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡后得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放置于冰上保存。

4. 重复类似步骤逐步稀释至所需的标准曲线样品浓度。

三、试剂配制 (试剂准备区)

根据待检样品数量准备相应的qPCR管，加入必要的成分以备后续实验（详细成分见使用说明书）。

四、添加模板 (模板添加区)

向qPCR管中分别加入2μL模板，按照阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照的顺序添加，最后离心30秒后即可进行扩增反应。

五、扩增反应 (扩增及产物分析区)

将PCR管放入PCR扩增仪器的样品槽中，按照指定的扩增程序进行反应（具体程序可参见详细说明书）。

六、结果分析

若制作标准曲线，请使用阳性对照浓度的log值为X轴，以Ct值为Y轴绘制标准曲线，进而推算样品DNA浓度。如果未制作标准曲线，则按以下标准判定结果：

阳性对照结果为Ct值<30，并呈现明显指数增长，形成典型S型曲线。

阴性对照结果则为Ct值38或无Ct值，无明显指数增长期和平台期。

样本时，Ct值<35表示阳性，Ct值38或无Ct值表示阴性，若Ct值在35-38范围，则需复检以确认结果。

运输及保存

本产品应在-20℃低温下运输和保存，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，以避免污染其他试剂。